C18 色谱柱压力升高问题排查与解决方案！

摘要：在 C18 色谱柱的使用过程中，压力升高是最常见的问题，不仅影响分离效果，更可能永久性损伤色谱柱。下面恒谱生将系统地分析导致压力升高的两大核心原因 ——盐析与颗粒物堵塞，并提供从预防到应急处理的全套解决方案。

1. 压力升高的核心原因一：盐析（化学性堵塞）

盐析是导致色谱柱压力升高的首要原因。当流动相中的缓冲盐(如磷酸盐、乙酸铵)在高有机相环境下析出时，会形成微小结晶，堵塞色谱柱填料的微孔。

如何判断？

压力升高通常发生在梯度程序中有机相比例升高的阶段。

在仪器的管路接头处或放空出口处可见白色颗粒状沉淀。

解决方案：

初步冲洗：断开检测器，用10%-20% 甲醇 / 水以 1.0 mL/min 的流速冲洗。

严重堵塞处理：

低速过夜冲洗：若压力过高，可降至 0.2 mL/min 的流速，用高水相流动相冲洗过夜。

反向冲洗：如果正向冲洗无效，可尝试将色谱柱反接，用高水相流动相低速冲洗。这通常能有效清除堵塞在柱头的盐结晶。

注意：反冲可能会影响柱效，建议作为备选方案。

2. 压力升高的核心原因二：颗粒物堵塞（物理性堵塞）

如果您的实验中不使用或很少使用缓冲盐，但压力依然升高，那么很可能是颗粒物堵塞了柱头。

污染源：

样品：未经过滤或过滤不彻底。

流动相：未使用 0.45μm 或 0.22μm 滤膜过滤。

仪器部件：如泵头磨损产生的金属碎屑。

解决方案：

根源排查：

严格执行样品前处理，使用 0.22μm 的针式过滤器。

确保所有流动相在使用前均通过 0.45μm(或 0.22μm)的滤膜过滤并脱气。

定期检查和维护液相色谱仪。

物理清除：

使用保护柱：这是最有效的预防措施，它会首先拦截所有颗粒物。

更换保护柱芯或柱前筛板：如果堵塞发生，直接更换消耗性部件即可，无需处理分析柱。

反向冲洗：对于分析柱本身的堵塞，反向冲洗同样是一种有效的应急手段。

3. 建立系统化的预防机制

“预防远胜于治疗”，建立一套标准的操作流程(SOP)是避免压力问题的根本。

实验前：

检查流动相是否新鲜，是否已过滤脱气。

若色谱柱保存于纯有机相，需先用高水相(10%-20% 有机相)过渡 10-20 倍柱体积。

实验后：

关键步骤：用高水相(10%-20% 有机相)冲洗 10-20 倍柱体积，彻底置换出柱内的缓冲盐。

最后用纯有机相封柱保存。

硬件配置：

柱温箱：保持恒定温度，避免因温度波动导致盐析。

保护装置：根据预算和需求，选择加装保护柱或柱前过滤器。