各类中药制剂定性、定量分析：从合剂到注射剂的方法与实例！

中药制剂由药物细粉或药物提取物加适宜辅料制成。由于多为复方，组成复杂，且夹杂辅料干扰，除个别液体制剂外，大多取样后需经提取、分离、净化才可进行定性、定量分析。中药制剂种类不同，所测成分不一，具体采用哪种提取分离净化方法，需根据被测成分的化学性质、剂型特点及干扰情况综合决定。同一种成分在不同剂型或干扰条件下，提取分离净化方法可能有所不同。本文以不同剂型的分析前提取分离净化常用方法进行介绍，测定方法则根据选定成分采用相应方法分析。

一、合剂与口服液的分析与检测

(一)合剂

合剂是指中药材经提取、浓缩制成的内服液体剂型。其为水溶性液体制剂，含杂质较多，或有一定黏稠度，或呈混悬液状态，大多需净化分离后进行鉴别和测定。常用净化方法包括：

液-液萃取法：可利用被测成分的酸碱性，将提取溶液调成碱性或酸性，以利于有效成分分离。

柱色谱法：如采用大孔吸附树脂进行分离，再用乙醇洗脱，纯化后以对照品进行鉴别。

例如，凉解感冒合剂采用D101型大孔树脂分离，以乙醇洗脱，以连翘苷为对照品进行鉴别;含量测定则采用高效液相色谱法，在流动相中加入缓冲溶液形成反离子色谱，避免分离中出现拖尾和强吸附现象。

实例：凉解感冒合剂

【处方】 鱼腥草、黄芩、板蓝根、连翘、金银花

【性状】 本品为棕色至棕褐色液体;气微香，味甜、微苦涩。

【鉴别】

(1)取本品20mL，加稀盐酸调节pH值至2.用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20mL，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为供试品溶液。另取绿原酸对照品，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各1mL，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以乙酸乙酯-甲酸-水(8:1:1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

(2)取本品3mL，加乙醇10mL，摇匀，滤过，取滤液作为供试品溶液。另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5～10mL，分别点于同一以4%醋酸钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5:3:1:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

(3)取本品用5%氢氧化钠溶液调节pH值至11～12.用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取鱼腥草对照药材5g，加水100mL，煎煮30min，滤过，滤液用乙酸乙酯振摇提取，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各1～2mL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷-丙酮(15:1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

(4)取本品50mL，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次50mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加30%甲醇5mL使溶解，通过已处理好的D101型大孔吸附树脂柱(内径为1cm，柱高为15cm)，用30%乙醇50mL洗脱，弃去洗脱液，继以50%乙醇50mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取连翘苷对照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各5mL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-冰醋酸(17:2:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

【含量测定】 高效液相色谱法测定黄芩苷

(1)色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-0.2%磷酸溶液(52:48)为流动相;检测波长为315nm。理论板数按黄芩苷峰计应不低于2500.

(2)对照品溶液的制备 取在60℃真空干燥4h的黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含50μg的溶液，即得。

(3)供试品溶液的制备 精密量取本品1mL，置50mL量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀，即得。

(4)测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品每1mL含黄芩以黄芩苷(C₂₁H₁₈O₁₁)计，不得少于1.5mg。

(二)口服液

口服液多数按注射剂工艺制成，杂质含量相对较少，有些可直接进行分析与检测。若药味较多、成分复杂时，仍需经分离净化后测定。分离、纯化及净化方法与合剂相同。先进行必要的醇提取，以对照品为参照直接采用薄层鉴别。对含杂质较多的物质，可采用大孔树脂或聚酰胺进行分离，将分离物质浓缩后以对照品进行鉴定。含量测定方法与合剂基本相同，需注意在液相色谱分离中，流动相加入的缓冲溶液应在柱子耐受的pH范围内使用。

实例：健胃消食口服液

【处方】 太子参、陈皮、山药、麦芽(炒)、山楂

【鉴别】

(1)取本品20mL，加乙醇56mL，摇匀，冷藏过夜，滤过，滤液浓缩至近干，残渣加70%乙醇10mL使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液。另取太子参对照药材1g，加70%乙醇10mL，超声处理30min，滤过，滤液作为对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13:7:2)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在110℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

(2)取本品2mL，置D101型大孔吸附树脂柱(内径1.5cm，柱高15cm)，以水50mL洗脱，弃去水液;再用30%甲醇20mL洗脱，弃去洗脱液;继用70%甲醇20mL洗脱，再用甲醇60mL洗脱，收集70%甲醇和甲醇洗脱液，浓缩至近10mL，移入10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取橙皮苷对照品适量，加甲醇制成每1mL含50μg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μL，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铝甲醇溶液，放置2.5h，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

【含量测定】 高效液相色谱法测定橙皮苷

(1)色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-水(用冰醋酸调节pH值至3.0)(20:80)为流动相;检测波长为283nm。理论板数按橙皮苷峰计算应不低于2000.

(2)对照品溶液的制备 取橙皮苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含60μg的溶液，即得。

(3)供试品溶液的制备 精密量取本品15mL，置50mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，静置12h，滤过，取续滤液，即得。

(4)测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各2mL，注入液相色谱仪，测定，即得。

本品每1mL含陈皮以橙皮苷(C₂₈H₃₄O₁₅)计，不得少于70μg。

二、中药酒剂与酊剂的分析与检测

酒剂是用白酒浸提药材而制得的澄明液体制剂。酊剂系指药材用不同浓度的药用乙醇，经浸提或溶解药物而形成的澄明液体制剂。酒剂与酊剂的溶剂均含乙醇，蛋白质、黏液质、树胶等成分不溶于乙醇，故杂质较少，澄明度好，特别适合含挥发性成分的药物制剂。

酒剂和酊剂的含量测定大多需将样品分离净化后再进行定量分析。最常用的净化方法是将酒剂或酊剂加热蒸去乙醇，再用适当的有机溶剂提取，可去除较多杂质。

当被测成分为生物碱类时：蒸去乙醇后加碱(如氨水)碱化，再用有机溶剂提取。

当被测成分为酸性成分时：可用碱水提取，再酸化后用有机溶剂提取净化。

也可采用酸性染料与生物碱生成离子对后提取分离，或使用柱色谱法(如C₁₈柱、氧化铝柱、D-101大孔吸附树脂柱等)进行分离净化。

所得样品根据被测成分性质，可采用多种分析方法进行含量测定。

实例：三两半药酒

【处方】 当归、炙黄芪、牛膝、防风

【鉴别】 取本品50mL置水浴上蒸至约30mL，放冷，用乙醚20mL，振摇提取，分次提取乙醚液，挥干，残渣中加入无水乙醇1mL，使溶解，作为供试品溶液，另取当归对照药材0.2g，加入乙醚3mL，浸泡1h，取上清液体作为对照药材溶液，按照薄层色谱法中试验，吸取供试品溶液6μL、对照药材溶液1～2μL，分别点于同一硅胶G板上，以正己烷-乙酸乙酯(9:1)为展开剂，展开，取出，晾干，置于紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显示同颜色的荧光斑点。

三、中药注射剂的分析与检测

中药注射剂系指中药材经提取、精制后制成的供注入体内的灭菌溶液，以及供临床使用前配成溶液的无菌粉末。由于注射剂的特殊工艺要求，含杂质较少，有些可直接作为供试品溶液。当所含成分干扰较大，在所选方法下不能直接测定时，需经分离净化后方可进行定量分析。

常用分离净化方法与口服液相似，包括：

液-液萃取分离法：可利用被测成分的酸碱性，将溶液调至一定pH值以利于有效成分提出。

色谱法：如柱色谱法、薄层色谱法、纸色谱法等。

在分析时需注意注射剂中附加成分的干扰。注射剂常添加助溶剂、抗氧剂、抑菌剂等，例如以吐温-80为助溶剂时，其与生物碱沉淀剂能产生沉淀，从而干扰生物碱类成分的分析。

实例：喘可治注射液

【处方】 淫羊藿、巴戟天

【性状】 本品为淡黄色的澄明溶液。

【鉴别】 精密吸取本品1mL，转入预先依次以甲醇、水各10mL洗脱备用的C₁₈预处理小柱内，依次用水、甲醇各10mL洗脱，取甲醇洗脱部分，浓缩至干。残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液。另取【含量测定】项下淫羊藿苷的对照品储备液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μL与对照品溶液5μL，分别点于同一以0.1mol/L磷酸氢二钠、0.3%羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸丁酯-甲酸-水(1.3:1:1)10℃以下放置分层后的上层溶液为展开剂，展开，展距约8cm，取出，晾干，喷以5%三氯化铝乙醇溶液，105℃加热数分钟后，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

【含量测定】 高效液相色谱法测定淫羊藿苷

(1)色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;甲醇-0.4%磷酸(55:45)为流动相;检测波长为270nm;理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于4000.

(2)对照品溶液的制备 精密称取经五氧化二磷干燥过夜的淫羊藿苷对照品适量，用甲醇溶解，制成每1mL含0.2mg的溶液，作为对照品储备液，精密吸取2mL，置10mL量瓶中，并用流动相稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。

(3)供试品溶液的制备 精密吸取本品1mL，置10mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。

(4)测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μL，注入液相色谱仪，测定，计算，即得。

本品每1mL含淫羊藿苷(C₃₃H₄₀O₁₅)，不得少于0.48mg。