食品、饲料、土壤中六六六、滴滴涕和多氯联苯样品前处理方法汇总(实验室实操版)！

在食品安全检测、饲料检测以及环境土壤检测中，六六六(BHC)、滴滴涕(DDT)和多氯联苯(PCB)属于比较常见的有机氯污染物检测项目。很多实验室在做这类项目时，真正麻烦的往往不是仪器分析，而是样品前处理。

尤其是鱼肉、茶叶、油脂含量高的饲料以及颜色较深的土壤样品，经常会遇到：

●  提取液颜色深;

●  浓硫酸净化次数多;

●  回收率不稳定;

PCB138回收偏低;

●  基质干扰严重;

上机后杂峰多等问题。

目前食品、饲料、土壤中六六六、滴滴涕及多氯联苯检测，常涉及以下标准方法：

●  GB/T 5009.19—2008(第二法)

●  GB/T 13090—2006

●  GB 5009.190—2014(第二法)

●  GB/T 14550—2003

不同标准在称样量、提取溶剂、净化方式以及色谱柱选择方面存在一定差异。下面结合实验室实际检测经验，对这些方法进行整理归纳，方便实验人员在实际工作中参考。

一、食品、饲料、土壤样品前处理步骤

1、样品提取方法

(1)称样

准确称取2.0g(±0.01g)样品于50mL离心管中。

其中：

饲料样品建议加入4～5滴磷酸;

土壤样品一般不做均质处理。

实验室实际检测中，很多单位会根据检出限要求调整称样量。但对于常规筛查项目，2g称样基本能够兼顾效率与回收率。

(2)加入提取液

加入20mL丙酮+正己烷混合溶液(1+2.V/V)，同时加入10g无水硫酸钠进行分散提取。

这里要注意：

无水硫酸钠不仅是除水，更重要的是帮助样品充分分散。实际操作中，如果样品与无水硫酸钠结块，一定要尽量打散，否则容易导致提取不充分。

随后：

食品及饲料样品均质约30s;

土壤样品直接超声提取30min。

均质完成后，再用20mL丙酮+正己烷(1+2.V/V)清洗均质头。

对于土壤样品，残渣还需继续使用20mL丙酮+正己烷进行涡旋提取，然后合并全部提取液。

(3)离心与脱水

提取液以3500r/min离心5min后，取上清液经装有10g无水硫酸钠的漏斗脱水，收集至鸡心瓶中。

随后再使用10mL丙酮+正己烷冲洗漏斗残渣，并合并洗液。

之后在40℃条件下浓缩至干。

这里很多实验员容易忽略一个问题：

如果浓缩温度过高，部分易挥发组分可能会受到影响，因此一般建议控制在40℃左右。

(4)氮吹浓缩与定容

使用正己烷(2.5mL×3次)洗涤鸡心瓶，合并洗液后于35℃左右氮气吹干，再用正己烷定容至2.00mL，待后续净化。

实验室在做批量样品时，建议控制氮吹温度及时间，避免正己烷挥发过快导致定容误差。

二、浓硫酸净化步骤

食品、饲料及土壤样品中，油脂、色素以及复杂有机杂质较多，因此浓硫酸净化是六六六、滴滴涕和多氯联苯检测中非常关键的一步。

具体操作如下：

先向提取液中加入约1mL浓硫酸。

前3次一般不进行涡旋，而是直接离心，然后弃去下层浓硫酸层。

这样做的目的主要是：

避免剧烈震荡后产生大量乳化，影响后续分层。

之后继续加入约1mL浓硫酸，进行适当涡旋，再离心弃去酸层。

重复净化，直到下层浓硫酸层基本澄清为止。

对于颜色深、油脂高的样品，净化次数往往会明显增加。

例如：

鱼类样品;

肉制品;

茶叶;

部分动物性饲料。

这些样品在实际检测中，经常需要更换新的离心管继续净化。

三、不同标准方法之间的主要差异

1、色谱柱选择差异

不同标准使用的色谱柱并不完全一致。

例如：

实验室实际应用中，更常见的是：

HP-1

HP-5

DB-5MS等效柱

具体仍需根据仪器状态及方法验证情况进行选择。

2、称样量差异

各标准的称样量差别较大：

实际实验室操作中，为了方便批量检测，很多实验室会统一采用2.0g称样。

但如果样品本底较低，或者检出限要求较严，仍建议适当增加称样量。

3、提取溶剂差异

六六六、滴滴涕检测中：

GB/T 5009.19—2008和GB/T 14550—2003多采用：

丙酮;

石油醚。

而GB 5009.190—2014(第二法)中的多氯联苯检测，则采用：

正己烷;

二氯甲烷。

不过从实验室实际应用来看，丙酮+正己烷的通用性会更高一些，同时兼顾提取效率与操作便利性，因此很多实验室会统一采用该体系。

四、多氯联苯检测中的几个常见问题

1、PCB138回收率偏低

这是实验室比较常见的问题。

尤其是在复杂基质中：

PCB138的回收率通常会低于其他PCB组分。

因此：

●  净化步骤;

●  内标回收情况;

●  氮吹过程;

●  都需要重点关注。

2、油脂干扰严重

如果发现提取液含油量较高，可在浓硫酸净化前增加：

正己烷-乙腈液液分配步骤。

具体做法为：

在氮吹后分别加入：

●  正己烷3mL;

●  乙腈3mL;

涡旋混匀后去除正己烷层，再重复一次。

剩余乙腈相氮吹后，再用正己烷定容至2mL。

这个步骤对于：

●  鱼类;

●  动物源样品;

●  高脂饲料;

效果通常比较明显。

五、加标回收与标准工作液配置

1、加标回收要求

采用空白样品进行加标：

准确吸取0.02μg/mL混合标准工作液1.00mL加入空白样品中，对应最终加标水平为0.01mg/kg。

多氯联苯项目需额外加入：

PCB198内标1.00mL。

一般要求：

有机氯回收率在60%～120%;

多氯联苯回收率在60%～120%。

如果回收率不符合要求，则需要重新检查：

●  提取是否充分;

●  净化是否过度;

●  氮吹是否损失;

定容是否准确。

2、标准工作液配置

六六六、滴滴涕上机液

准确吸取：

0.02μg/mL混合标准工作液5.0mL，定容至10mL，得到0.01μg/mL上机液。

多氯联苯上机液

分别吸取：

0.2μg/mL PCB混标0.50mL;

0.2μg/mL PCB198内标0.50mL;

定容至10mL，得到0.01μg/mL多氯联苯上机液。

六、实际检测中的几个经验建议

1、复杂基质不要急着涡旋

很多新实验员一加浓硫酸就直接剧烈涡旋，结果容易乳化。

对于：

●  茶叶;

●  肉制品;

●  鱼类;

●  深色土壤;

前几次净化建议先离心，再逐步增加涡旋。

2、浓硫酸不要一次加太多

浓硫酸加入量过大，有时反而会导致目标物损失增加。

实际操作中，少量多次净化通常效果更稳定。

3、阳性样品建议复测

如果检出阳性样品：

建议做双平行;

使用至少5点标准曲线;

检出值尽量位于曲线中间区域。

若含量较高，则建议稀释后重新上机。

七、结语

食品、饲料及土壤中六六六、滴滴涕和多氯联苯检测，真正影响结果稳定性的，往往不是仪器本身，而是样品前处理是否充分、净化是否彻底以及复杂基质干扰是否处理到位。

不同实验室在设备、样品类型及检出限要求方面存在差异，因此在实际检测过程中，可结合标准方法与实验室实际情况，对提取体系、净化流程及定容方式进行适当优化，从而提高检测稳定性和实验效率。

作为长期从事分析检测与色谱应用技术服务的团队，恒谱生在复杂基质样品前处理、有机氯污染物分析、色谱方法开发及实验室检测优化方面积累了较多实际经验，可为食品、环境、饲料及化工行业提供相关分析检测与技术支持服务。

本文方法为实验室经验总结，仅供参考。用于法定检测时请以国家标准为准。”