高效液相色谱柱保护柱的分类与选择

  液相色谱柱保护柱分类及选择:
  
  从材质上分:不锈钢材质和PEEK(聚醚醚酮)材质

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  PEEK 材质优缺点——样品对金属离子比较敏感时,选择PEEK材质比较合适,比如某些蛋白分析会用到PEEK材质的分析柱,主要就是考虑到这方面的因素;
  
  不锈钢材质优缺点——大部分小分子化合物的分析,选择不锈钢材质保护柱居多,特别是当流动相体系使用到四氢呋喃(THF)或DMSO等一些溶解性较强的溶剂时,必须选择不锈钢材质,甚至对于HPLC系统的管路也需要替换成不锈钢材质,因THF对于PEEK管路有相当强的腐蚀作用。
  
  从结构上分:卡套式(柱芯+柱套)和直接填装短柱

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  直接填装短柱优缺点——这种结构的保护柱实质就是短的色谱柱,一般填装的填料跟分析柱填料完全一样。生物样品分析中,用这种类型保护柱居多,除可过滤一些不溶颗粒外,还可除去一些在分析柱上易吸附的杂质。缺点是,一次性使用,污染严重时,只能报废。
  
  卡套式保护柱优缺点——卡套式保护柱的柱套可反复使用,柱芯污染后可替换,厂家会提供配套的保护柱芯,但购买时需要注意,柱芯中有与分析柱匹配的填料,需要确认柱芯中的填料类型再购买。同时,柱芯和柱套需是来源于同一厂家的同一规格,否则,会存在匹配上的差异,导致峰型异常或者漏液。
  
  从连接方式上分:独立式和直连式

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  独立式液相色谱柱保护柱优缺点
  
  保护柱和分析柱之间用一段管路连接,不用担心与分析柱在连接上的匹配问题。但使用管路连接时,连接不当容易产生死体积。
  
  直连式保护柱优缺点——保护柱接口带螺纹,可直接与分析柱连接,死体积小,UPLC分析时建议选择直连式保护柱;缺点:购买时需保证接口与分析柱匹配。
  
  液相色谱柱保护柱选择考虑以下几方面因素:
  
  1. 除非特殊情况,一般选择填料基质与分析柱基质完全相同的保护柱。
  
  2. 选择保护柱尺寸可按柱体积计算,保护柱体积按分析柱体积的5%~10%即可;如4.6*250mm的分析柱体积约为4mL,保护柱体积可选择在0.2~0.4mL之间为宜。同时,保护柱内径应与分析柱内径相同或相当。
  
  液相色谱柱保护柱使用注意事项:
  
  1. 独立式保护柱与分析柱连接时,连接管路尽可能短,且接口切面平滑,尽量减少死体积以降低柱外展宽效应。
  
  2. 卡套式保护柱一般未标注液流方向,使用时最好自行标注,并按照标注方向来使用,以免正反向使用后,截留的杂质污染分析柱。
  
  3. 直接填装的短柱型保护柱,出现柱压升高或峰型变差时,可不接分析柱进行反向清洗,清洗溶剂可参考分析柱清洗溶剂。
  
  4. 卡套式保护柱,柱芯替换时,注意柱芯与柱套是否存在方向上的匹配,同时不易旋拧过紧,以防滑丝。
  
  5. 保护柱或柱芯一般不建议超声清洗,因可能对填料表面修饰有影响。
  
  6. 如同一保护柱配不同的分析柱使用,每次使用前,保护柱需先清洗并用流动相平衡保护柱一段时间后,再接分析柱使用。
  
  保护柱与柱前过滤器的区别和使用:
  
  使用保护柱的目的在于延长分析柱的使用寿命,当分析柱造价昂贵时,保护柱的价值尤其能体现,某些情况下,当使用的分析柱本身价格便宜,保护柱并非必选,推荐使用柱前过滤器更合适。
  
  柱前过滤器与保护柱两者外形相似,差异主要在于:保护柱内芯装有填料,而柱前过滤器内芯是可更换的滤片(一般为带孔的不锈钢烧结板)
  
  因此,从结构可以推测使用上的差异:
  
  柱前过滤器——通用性强,任何分析柱前都可使用,因其滤芯只起到过滤和截留杂质的作用,滤片污染后可超声清洗,反复使用。
  
  保护柱——柱中填料除了起截留杂质的作用外,也可除去样品中易吸附的杂质,这一点对生物样品分析尤其重要。


发布于: 2023-05-22